大腸桿菌是導(dǎo)致仔豬腸道功能紊亂及腹瀉的重要致病菌,其中ETEC K88是比較常見(jiàn)的致病菌之一,給養(yǎng)豬生產(chǎn)帶來(lái)重大損失。因此,為了揭示ETEC K88影響仔豬腸上皮細(xì)胞免疫功能的具體作用機(jī)制,喆圖小編有必要給大家分享一下ETEC K88攻毒(或不攻毒)的IPEC-J2細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)的變化。

       ETEC K88血清型為O149:K91:K88ac。試驗(yàn)共分為2個(gè)處理組(對(duì)照組、K88組),每個(gè)處理組3個(gè)重復(fù)。將腸上皮細(xì)胞IPEC-J2接種于Transwell 6孔板上室,加入DMEM/F12*培養(yǎng)基,待細(xì)胞分化后(約為1.3×10~6個(gè)/孔),用ETEC K88攻毒處理細(xì)胞(K88:細(xì)胞=50:1),于37℃、5%氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 h。

       對(duì)差異表達(dá)基因(differentially expressed genes,DEGs)的GO(gene ontology)分析顯示,共553個(gè)DEGs注釋到21個(gè)GO條目,這些條目主要參與細(xì)胞過(guò)程、生物過(guò)程、代謝調(diào)節(jié)、信號(hào)調(diào)節(jié)、發(fā)育過(guò)程及免疫過(guò)程等。

       氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)結(jié)束后,PBS清洗細(xì)胞2遍后收集細(xì)胞。采用RNA-Seq技術(shù)研究2組細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組,并對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,ETEC K88攻毒后,得到差異表達(dá)基因共126個(gè),其中上調(diào)基因?yàn)?0個(gè),下調(diào)基因?yàn)?6個(gè)。

       通過(guò)對(duì)差異表達(dá)基因的Pathway分析表明,差異表達(dá)的基因顯著富集于22個(gè)代謝通路。表明ETEC K88攻毒后顯著影響了IPEC-J2細(xì)胞的Toll-like受體信號(hào)通路、腫瘤壞死因子(TNF)信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路、T細(xì)胞信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路以及趨化因子等信號(hào)通路。

       這些差異表達(dá)的基因大多富集于免疫反應(yīng)及炎癥反應(yīng)的相關(guān)通路中,表明差異表達(dá)基因在細(xì)胞中發(fā)揮了類(lèi)似的功能。綜上,ETEC K88攻毒后,細(xì)胞發(fā)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)及炎癥反應(yīng),這可能是ETECK88導(dǎo)致仔豬腹瀉的重要原因之一。

       以上就是本篇的全部?jī)?nèi)容了，如需了解更多技術(shù)知識(shí)，歡迎聯(lián)系上海喆圖科學(xué)儀器有限公司。